單抗與多抗的區別是什么

摘要:本文主要介紹了單克隆抗體與多克隆抗體的定義,并介紹單抗、多抗在制備流程、特點及應用上的區別。

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單抗與多抗的定義

抗原上可以引起機體產生抗體的分子結構叫做抗原決定簇,也稱為抗原表位。一個抗原可以有許多不同的抗原決定簇,因此,機體也可以產生多種不同的抗體。由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅識別某一特定抗原表位的抗體,稱為單克隆抗體(單抗)。而由多個B淋巴細胞克隆產生的,受到多種抗原決定簇刺激并可以與多種抗原表位結合的抗體就是多克隆抗體(多抗)。從某種角度而言,多抗是多種單抗的混合物。

單抗和多抗制備上的區別

經過特定抗原處理過的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞通過細胞融合的方法得到雜交瘤細胞,經HAT培養基篩選、ELISA檢測效價后就得到陽性克隆株,最后進行細胞培養或將細胞注入到動物(一般為balb/c小鼠)腹腔中用腹水培養,收集上清/腹水純化后就能得到單克隆抗體。而制備多克隆抗體就沒有單克隆抗體繁瑣,只需將抗原(純度越高越好)直接注入到動物體內進行免疫,經過3~4次免疫,ELISA測其效價合格后,收集血液離心得到上清,純化后即能得到多克隆抗體。因此多抗制備周期比單抗的短,多抗首次制備價格也比單抗要低。

單抗多抗應用上的區別

單抗和多抗都有各自鮮明的特點與優勢。單克隆抗體的特異性高,一旦制備成功就可以永續的生產完全一致的單克隆抗體,因此可以對其特異性進行全面、系統地驗證。但如果所識別的抗原表位被破壞,實驗的結果將會受到很大的影響,這也是單抗的缺點之一。而多克隆抗體的特異性較差,即使是使用相同的抗原制備多抗,不同批次間也會存在差異,因而在特異性、一致性方面有很大的局限。所以在用多抗做免疫檢測時,更容易造成背景,例如在WB中有雜帶,在IHC中背景較深等等。雖然還存在著交叉反應*的問題,但由于多抗識別多個抗原表位,即使是有少數幾個抗原表位被破壞或者抗原構象改變,實驗的結果也不會受到影響。在相同條件下,使用多抗可以提高檢測的靈敏度,對于豐度偏低的蛋白也更容易檢出。

如果對抗體的特異性要求高,用量較大或需要長期使用一致的抗體,制備的抗體應用要求多(WB/IP/IF/ICC等),可以選擇制備單克隆抗體。若對抗體的特異性要求不高,需要做沉淀和凝集反應的檢測性實驗或者只需做ELISA檢測,可以選擇制備多克隆抗體

單克隆抗體與多克隆抗體與抗原結合對比

單克隆抗體與多克隆抗體的對比表格

多克隆抗體 單克隆抗體
對免疫原的要求 免疫原純度越高越好 不純的免疫原也能得到高純度的抗體
特異性 高(抗原親和純化)
穩定性 較好 相對較差,對理化條件敏感
標準化 較難,不同批次的抗體質量差異大 易于標準化,批次間差異小
識別 多表位 只有一個抗原表位
交叉反應 很常見,難避免非特異反應 不常見,可避免非特異反應
凝集反應 大多數沒有
沉淀反應 大多數沒有
成本
周期

* 交叉反應:從理論上說,用小鼠抗原制備的抗體應只能用于小鼠,但是由于動物種屬之間,特別是相近的動物之間存在著同源性(如大鼠與小鼠),這樣會導致抗體發生交叉反應,即用一種動物抗原制備的抗體也可與其它一些物種的抗原反應。

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