重組蛋白流程優化服務

南京德泰生物的流程優化服務是原核蛋白表達服務平臺的重要組成。它可以為您的重組蛋白交付優化的表達及純化方案,用以滿足活性及大量制備的要求。

服務內容

步驟 周期 交付 費用
基因合成及亞克隆 項目方案設計 2~3weeks 實驗報告(包括:密碼子優化、載體-宿主菌的優化、表達條件優化) 詢價
密碼子優化
基因合成
克隆至載體
蛋白表達 轉化 1~2weeks
表達條件優化及鑒定
放大表達
蛋白純化 上清、包涵體純化條件優化 1~2weeks
蛋白復性條件優化

密碼子優化

密碼子優化是蛋白表達優化的重要步驟之一,在蛋白表達過程中,通常我們都會考慮表達載體和宿主系統是否為最佳條件,卻往往忽視了基因本身是否與載體或宿主菌是最佳匹配這一實質性的問題。

由于密碼子的使用偏好性不同,當在不同物種上進行表達時,往往得不到很好的結果。針對這一難題,我們在不改變蛋白性質的前提下,對您的基因進行優化,目的在于表達出盡可能接近天然構象的重組蛋白質。重組蛋白表達的關鍵要素包括基因、載體、表達宿主、表達培養條件。這些要素之間相互影響,為了更好地達到優化的目的,需將目標放到其所在上下文中進行優化。優化的設計點可以從基因合成、載體構建、基因轉錄、mRNA翻譯等過程中提取,如下:

密碼子優化指標

密碼子優化案列

蛋白:mIL9 載體:pET30a 宿主菌:Bl21

如圖,對目標蛋白mIL9進行密碼子優化與未優化的表達結果,15℃條件下,都沒有表達,37℃條件下,經過密碼子優化的mIL9蛋白在16kd處明顯有條帶(表達)。

密碼子優化案例

載體、宿主菌優化

  種類 選擇
載體 pET 我們有十五種載體和八種宿主菌可供選擇,選擇依據①目的蛋白的應用 ②目的蛋白已知特定信息等其他要求,嘗試多種載體、宿主菌組合。
pGEX
其他
宿主菌 BL21(DE3)
Origami B
其他

蛋白表達條件優化

為了提高大腸桿菌的重組蛋白表達水平,抑制包涵體的生成我們選用特定表達菌株、采用與分子伴侶共表達、降低目標蛋白表達溫度、調整誘導溫度等手段優化,進行48種表達條件摸索,最終確定最佳組合。

表達條件優化矩陣

蛋白純化條件優化

我們蛋白純化常用的方法有:親和層析、離子交換色譜、凝膠層析法。純化因蛋白而異,采用不同的純化策略。
針對包涵體,我們擁有自己獨特的復性方法(復性服務),通過比對找到最佳的復性方法和最優的復性條件,保證提供的蛋白活性最佳。

純化案例

以親和層析為例,如圖為不同濃度的洗脫液洗脫的SDS-PAGE圖

純化條件優化

詢價與訂購

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