ForteBio Octet?檢測分子間相互作用

相關服務:ForteBio 分子互作檢測服務

Octet?RED96分子間相互作用檢測系統是由ForteBio公司生產的全自動測試平臺,可用于測量蛋白質與生物分子之間的相互作用。該系統基于生物膜層光學干涉(BLI)技術,只需微量樣本,無需標記,可提供生物分子相互作用的實時分析結果。Octet?RED96系統在蛋白質分析方面的卓越表現能夠加快和簡化您的科研與生產流程。

ForteBio?Octet?檢測原理

生物膜層光學干涉(BLI)技術

當兩列或幾列光波在空間相遇時,會進行疊加,這種現象稱為光的干涉。ForteBio Octet?儀器就是利用了光的干涉現象。ForteBio Octet?儀器內部有生物傳感器,生物傳感器底端由生物膜層覆蓋,生物膜層可結合并固定生物分子。當具有一定帶寬的可見光垂直入射生物膜層時,光在生物膜層的兩個界面反射后形成一定波長的干涉波(圖(a))。當固定分子與溶液中分子發生相互作用時,生物膜層厚度增加,干涉光譜曲線向波長增加的方向移動(圖(b)),光波相位移動由工作站實時探測,對光波的相位移動進行分析便可定量得出傳感器表面分子數量變化及相關濃度與動力學數據。

ForteBio Octet?儀器檢測原理

ForteBio Octet?檢測儀器內部結構
ForteBio Octet?檢測儀器內部結構
圖(a):在生物膜界面反射后形成一定波長的干涉波
圖(b):生物膜層厚度增加,干涉光譜曲線向波長增加的方向移動

操作流程

分子間相互作用服務頁有詳細的ForteBio Octet?操作流程視頻演示。利用Octet可以實現分子間相互作用的定性定量分析或對蛋白混合物種的樣品濃度進行定量測定。

  • 對蛋白質相互作用進行定性定量分析,ForteBio Octet?儀器的操作流程(Octet傳感器的傳感順序)為“Buffer-Ligand Biotin-Buffer-Protein of Interest-Buffer”,每一步操作都可以得到相應的曲線(如下圖所示)。

    進行蛋白質相互作用定性定量分析操作流程

  • 對蛋白質混合物中樣品濃度進行定量測定,Otet傳感器的傳感順序為“Standards-Test Samples”,儀器先對標準品進行測定并繪制標準曲線(下圖a),再接著對待測樣品進行測定,并將得到的數據插入標準曲線(下圖b),根據標準曲線可準確得到樣品濃度。

    進行蛋白質混合物中樣品濃度測定操作流程

ForteBio Octet?檢測范圍

可檢測的樣品包括:蛋白與蛋白,蛋白與小分子,抗原與抗體,蛋白和抗體Fab片段,DNA與DNA
可測定的數據包括:判斷分子間有無親和力;測得判斷分子間親和力及解離速率數據,包括結合常數,解離常數和親和常數。
檢測范圍:
Fortebio 檢測范圍

ForteBio Octet?的應用

fortebio-octet-4

BLI方法和傳統的免疫共沉淀方法對比優勢

  • 動力學數據實時測定:可實時檢測分子間相互作用動力學數據,可實現對分子間瞬時相互作用的檢測。
  • 更高的通量、更快的實驗流程:8-16個樣品同時檢測,是非標記技術中通量最高的;15-30分鐘可以完成96個樣品的分析。
  • 更寬的應用范圍:直接檢測粗制的樣品,甚至是樣品中存在不溶解的成分,耐受各種溶液環境,只有結合到傳感器表面的分子才會被檢測。病毒顆粒等大分子樣品也能得到動力學結果。
  • 結果精準:精細的定量化分析,并獲得動力學參數以獲得更多的生物學信息。非標記,非變性檢測,更能真實的反應情況。

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